分光光度法的使用使用始于牛顿，1665年牛顿做了一个试验：他让太阳光透过暗室窗上的小圆孔，在室内形成很细的太阳光束，该光束经棱镜色散后，在墙壁上呈现红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫的色带。这色带就称为“光谱”。牛顿通过这个实验，揭示了太阳光是复合光的事实。1815年夫琅和费仔细观察了太阳光谱，发现太阳光谱中有600多条暗线，并且对主要的8条暗线标以A、B、C、D、E、F、G、H符号。这是人们zui早知道的吸收光谱线，被称为“夫琅和费线”，但当时对这些线还不能做出正确的解释。1859年本森和基尔霍夫发现由食盐发出的黄色谱线的波长和“夫琅和费线”中的D线波长*一致，才知道一种物质所发射的波长（或频率），与它所能吸收的波长（或频率）是一致的。1862年密勒应用石英摄谱仪测定了100多种物质的紫外吸收光谱。他把光谱图表从可见区拓展到了紫外区，并指出吸收光谱不仅与组成物质的基因有关，而且与分子和原子的性质有关。此后，哈托莱和贝利等人又研究了各种溶液对不同波段的截止波长。并发现与吸收光谱相似的有机物，它们的结构也相似。并且可以解释用化学方法所不能说明的分子结构问题，初步建立了分光光度法的理论基础，以此推动了分光光度计的发展。1918年美国国家标准局研制成了世界上*台紫外可见分光光度计，此后，分光光度计得到了发展，并且很快在各个领域的分析工作中得到了应用。1760年琅伯发现物质对光的吸收与物质的厚度成正比，后被人们称之为琅伯定律；1852年比尔发现物质对光的吸收与物质的浓度成正比，后被人们称之为比尔定律。在应用的过程中，人们把琅伯定律和比尔定律结合起来，称之为琅伯-比尔定律，从此之后人们开始重视物质对光的吸收，并在对物质的定性和定量的分析中使用，很多的科学家在琅伯-比尔定律的基础上研制了很多用于分析的仪器，其中就包含“紫外可见分光光度计”。1945年美国Beackman公司推出了世界上*台成熟的紫外可见分光光度计，并开始向市场推广，随后紫外可见分光光度计开始得到了飞速的发展。